橄欖葉提取物-山楂酸在人結直腸腺癌細胞系 HT-29 中的有效抗增殖活性。三萜在高達 250 μM 時未表現出非特異性細胞毒性，但在暴露 72 小時后發揮劑量依賴性抗增殖活性，IC 50為 101.2 μM。Reyes等人發現了類似的結果。在結腸癌細胞系 HT-29 和 Caco-2 中，與三萜一起孵育 72 小時導致細胞生長受到 IC 50抑制分別為 61 μM 和 85 μM。同一作者的進一步實驗表明，山楂酸通過阻止細胞周期發揮其抗增殖活性，因為 G0/G1 期細胞群顯著增加，而 S 期細胞群減少。值得注意的是，在這兩項研究中，該化合物對細胞增殖的影響與凋亡細胞死亡同時發生。
與載體處理的細胞相比，caspase-3 的激活在暴露于 250 μM 三萜的 24 小時時超過 60 倍。為了了解 caspase-3 的激活是由外在途徑還是內在途徑引起的，對超氧陰離子的產生進行了評估，因為它是后者的可能誘導物之一。實際上，與對照相比，在用山楂酸 (150 μM) 孵育 4 小時的細胞中發現了更高水平的 O 2 - 。質膜崩解和核碎裂的發生進一步證實了細胞凋亡過程。同樣，在 HT-29 和 Caco-2 細胞系中觀察到的細胞凋亡過程是通過激活 caspase-3 發生的，如細胞收縮或染色質濃縮等形態學變化的觀察所證明的那樣。
然后注意誘導線粒體凋亡途徑的分子事件。該細胞器是幾種促凋亡蛋白的儲庫，在適當的刺激下，這些蛋白會釋放到細胞質中，在細胞質中與其他元素的相互作用最終會觸發 caspase-3 激活。該通路的一組重要調節因子是 Bcl-2 家族，其中包括抗凋亡和促凋亡成員。
Reyes-Zurita等人進行的實驗。用 HT-29 細胞表明山楂酸同時激活 Bax（促凋亡蛋白）的表達并抑制 Bcl-2（抗凋亡蛋白）的表達，導致線粒體破壞和細胞色素-c 釋放到胞質溶膠。眾所周知，一旦進入細胞質，細胞色素-c 就會與 Apaf-1 結合，從而觸發 caspase-9 和 caspase-3 的順序激活。雖然在這項研究中沒有直接測定復合物的形成，但觀察到兩種 caspase 的強烈時間和劑量依賴性裂解。
最近，同一位作者假設橄欖葉提取物-山楂酸對 Bcl-2 家族蛋白的影響可能是由激酶 JNK 介導的，因為在用三萜處理 12 小時后發現其在 HT-29 細胞中的表達增加。實際上，之前已經描述了 JNK 的一些作用。鶴田等人。發現 JNK 通過 Bax 細胞質錨的磷酸化（失活）促進 Bax 易位至線粒體。JNK 激活的另一個結果是 Bid（促凋亡蛋白）的裂解，這導致易位至線粒體和 Smac/DIABLO 釋放至胞質溶膠。這種蛋白質通過中和細胞凋亡抑制劑 (IAP) 誘導細胞凋亡. 除了 JNK 激活外，山楂酸還增強了 p53 的表達，p53 是一種眾所周知的腫瘤抑制轉錄因子，可調節細胞凋亡相關基因的表達，例如編碼上述 Bcl-2 和 Bax 蛋白的基因。
與內在途徑相反，外在途徑是由配體與腫瘤壞死因子受體 (TNFR) 超家族的受體結合啟動的。這導致幾個元素的組裝，構成了所謂的復雜 I。接下來，兩種可能的方式觸發具有相反結果的細胞凋亡調節。一方面，復合物 I 可以激活激酶 IKK，負責 IKBα 的磷酸化及其隨后的降解。IKBα 通常在胞質溶膠中募集 NF-κB，但在其降解后，轉錄因子被釋放并轉移到細胞核，在細胞核中上調抗凋亡基因 . 另一方面，復合物 I 的某些元素可以交換，包括 procaspase-8 的募集，這導致二級復合物（復合物 II）的形成。procaspase-8 的激活導致下游效應子半胱天冬酶（如 caspase-3）的裂解，從而傳播凋亡信號。
橄欖葉提取物-山楂酸在死亡受體通路中的作用。使用胰腺癌細胞Panc-28。該化合物與 TNF-α 一起對抑制細胞增殖（10 μM 山楂酸）和誘導細胞死亡（25 μM）發揮協同作用，后者比對照高 55% 以上。細胞中活化的caspase-3的測定證實了細胞凋亡的發生。進一步的實驗表明，山楂酸通過抑制 IKBα 磷酸化影響 NF-κB 通路，從而阻止 NF-κB 易位至細胞核及其 DNA 結合活性。
橄欖葉提取物-山楂酸對 NF-κB DNA 結合活性的抑制作用也在 Raji B 淋巴瘤細胞系中得到證實。在這項研究中，NF-κB 的功能受損被用來解釋 COX-2 表達的劑量依賴性降低。COX-2 因其在炎癥過程中的作用而廣為人知，并且已被發現在廣泛的癌前和惡性組織中過度表達。
NF-κB 轉錄活性可通過絲裂原活化蛋白激酶家族 (MAPK) 的各種成員（包括 JNK 和 p38）的磷酸化作用進行調節 。吳等。首次描述橄欖葉提取物-山楂酸還與 p38 級聯相互作用，從而最終觸發促凋亡作用。實驗在兩種人唾液腺腺樣囊性癌細胞系 ACC-2 和 ACC-M 中進行，分別對應于低轉移和高轉移。孵育 24 小時后的抗增殖活性 (IC 50分別為 43.6 和 45.8 μM）歸因于細胞凋亡過程，觀察到的細胞凋亡小體和微觀結構變化（例如染色體 DNA 濃縮和微絨毛丟失）證明了這一點。暴露于三萜的細胞顯示出活化的 caspase-3，這是由于 p38 MAPK 磷酸化而發生的，而這反過來又是細胞內 Ca 2+濃度增加的結果。山楂酸引起細胞內 Ca 2+超載的機制仍有待研究。相反，p38 MAPK 在山楂酸誘導的細胞凋亡中的意義與在兩種人膀胱癌細胞系（T24 和 253J）中獲得的結果一致. 與三萜一起孵育會劑量和時間依賴性地增加 p38 磷酸化，這與細胞存活率降低相關（每種細胞系中的IC 50分別為 33.0 和 71.8 μM）。
最新的橄欖葉提取物-山楂酸體外抗增殖活性評估是在軟組織肉瘤細胞系 SW982（人滑膜肉瘤）和 SK-UT-1（平滑肌肉瘤）中進行的。將細胞與三萜孵育 24 小時后，IC 50值分別為 45.3 和 59.1 μM . 然而，這項研究最顯著的貢獻是山楂酸被提議作為已建立的抗癌藥物多柔比星的佐劑，這構成了治療癌癥疾病的新治療方法。具體而言，由于藥物在細胞內的積累增加，同時用兩種化合物處理的細胞對多柔比星表現出更高的敏感性。由于多柔比星是流出蛋白 P-gp 和 MRP1 的眾所周知的底物，因此當與山楂酸共孵育時，藥物在細胞內積累背后的一個似是而非的機制可能是三萜抑制了這些轉運蛋白。動力學研究表明，參數 V max和 K mP-gp 的（通過 Michaelis-Menten 方程獲得）不受山楂酸的影響，而 MRP1 的那些則呈劑量依賴性降低，因此表明山楂酸表現為 MRP1 的非競爭性抑制劑 。總結了在不同細胞系中發現的山楂酸抗增殖活性的IC 50值。
